bst lf 聚合酶能够切割探针吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-09-17 06:21 标签： bastard

体DNA分子与外源DNA分子摩尔数为1∶1～5∶1）补足ddH2O 至8μl。

3．轻轻混匀稍加离心，56℃水浴5min后迅速转入冰浴。

三、DNA聚合酶及其应用

（一）大肠杆菌DNA聚合酶I

是Kornberg A. 1956年首先从大肠杆菌EColi 細胞中分离出来的。它是一种多功能性的酶包括3种不同的酶活力：

A.5′→3′聚合酶活性（模板，带3′－OH游离基团的引物、4dNTPs、Mg2+ ）

B.双链特异性的5'→3'核酸外切酶活性。

C.3'→5'核酸外切酶活性

从游离的双链或单链DNA的3′端降解。不过对于双链的降解可被5′-3′的多聚活性所抑制主要是校正作用。

大肠杆菌DNA聚合酶I 的三种用途

1.利用缺口转移法制备高比活度的DNA针

利用其5′--3′的外切酶活性及其聚合酶活性

2.用于DNA连接前的大缺口填充

利用5′--3′的聚合酶活性。

3.用于DNA的序列分析

利用5′--3′的聚合酶活性

Klenow片段是大肠杆菌聚合酶I 全酶经枯草杆菌蛋白酶处理后产生的大片段酶分子，分子量为76KD

酶催活性：⑴5’ →3’ 的聚合酶活性

⑵3’ →5’ 的核酸外切酶活性

Klenow片段的主要用途（利用5’ →3’ 的聚合酶活性）：

⑴修补限制性酶消化DNA形成的3′隐蔽末端

⑵标记DNA片段的末端

⑶cDNA克隆中第二链cDNA的合成

T4DNA聚合酶是从T4噬菌体感染了的大肠杆菌中分离出来的，

⑴5′→3′的聚合酶活性

⑵3 ′→ 5 ′的核酸外切酶活性其外切酶活性要比大肠杆菌聚合酶I 的活性高200倍。比Klenow 片段酶强100～1,000倍

因此，可以综合利用这两种活性进行取代合成反应：

如果反应体系中仅存在一种dNTP或没有底物时这时T4DNA聚合酶就会表现出3 ′→5 ′外切酶活力，从双链DNA的3′开始降解直到露出底物dNTP相同的碱基。然后就在此位置发生合成和取代反应

(1)利用取代合成反应制备针

产品特点：1. 5′→3′DNA聚合酶活性泹不具有5′→3′外切核酸酶活性，因此没有纠错功能

2. 嗜温性，最适反应温度为68℃建议反应温度不要超过70℃。

3. 强链置换能力可以用于DNA鏈置换反应和LAMP扩增。还可用于68℃DNA测序(该条件尤其适用于富含GC的模板和纳克级的模板)

4. 不能用于热循环测序或PCR，80℃ 10分钟即可失活

我要回帖

更多关于 bastard 的文章

 

随机推荐