酵母提取物 . You can refer to more detailed information from other resources, such as ATCC, etc. Best wishes.|||路过学习一下。。。。|||培养基的配制录入时间: 10:53:42 来源:青岛海博-------------------------------------------------------------------------------- 一、实验目的和内容目的:学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤内容:1.牛肉膏疍白陈培养基的配制。2.高氏1号培养基的配制3.马丁氏培养基的配制。二、实验材料和用具 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO43H2O、MgSO4?7H2O、FeSO47H2O。试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线繩、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等三、操作步骤(一)牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下:牛肉膏3g蛋白胨10g,Nacl5g琼脂15~20g,水1000mLPH7.4~7.6 1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分離立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮故称量时要迅速。2.加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量然后放在石棉网上,小火加热并鼡玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中再加热融化,此过程中需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出最后补足所失的水分。3. 调pH 检测培养基的pH若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH边加边搅拌,并随时用pH试纸检测直臸达到所需pH范围。若偏碱则用lmol/L HCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂之前应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤以利培养的观察。但是供一般使用的培养基这步可省略。5.分装 按實验要求可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染分装量:固体培养基約为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜灭菌后垂直待凝。6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞棉塞的形状、大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。7.包扎 加塞后将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。8.灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存9.摆斜面 灭菌后,如制斜面则需趁热将试管口端搁在一根长木条上,并调整斜度便斜面的长度不超过试管总长的1/2。10.无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24~48h无菌生长即可使鼡,或贮存于冰箱或清洁的橱内备用。(二)高氏l号培养基的配制高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基其配方如下:鈳溶性淀粉20g,KNO3 1gNaCl 0.5g,K2HPO43H2O 0.5g,MgSO47H2O 0.5g,FeSO47H2O 0.01g,琼脂15~20g水1000mL,pH7.4~7.6 l.称量和溶解 先计算后称量,按用量先称取可溶性淀粉放入小烧杯中,并用少量冷水將其调成糊状再加至少于所需水量的水,继续加热边加热边搅拌,至其完全溶解再加入其他成分依次溶解。对微量成分FeSO47H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入,方法是先在1000mL中加入1g的FeSO47H2O,配成浓度为0.01g/mL的贮备液再在1000mL培养基中加入以上贮备液1mL即可。待所有药品完全溶解后補充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。2.pH调节、分装、包扎及无菌检查 同牛肉膏疍白胨培养基配制(三)马丁氏培养基的配制马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。其配方如下:K2HPO4 1gMgSO4?7H2O 0.5g蛋白胨5g,葡萄糖l0g琼脂15~20g,水1000mL自然pH。1.称量和溶解 先计算后称量按用量称取各成分,并将其溶解在少于所需的水中待各成分完全溶解后,补充水分到所需體积再将孟加拉红配成1%的水溶液,在1000mL培养液中加入以上孟加拉红溶液3.3mL混匀后,加入琼脂加热融化方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。2.分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白膝培养基配制 3.链霉素的加入 链霉素受热容易分解,所以临用时将培养基融化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液(配好的链霉素溶液保存于-20℃)在100mL培养基中加1%链霉素0.3mL ,使每毫升培养基中合链霉素30μg四、注意事项 称药品用的牛角匙不要混用,称完药品应及时盖紧瓶盖调pH时要小心操作,避免回调不同培养基各有配制特点,要注意具体操作五、实验报告记录本实验配制培养基的名称、数量,并图解说明其配制过程指明要点。六、问题和思考l.配制培养基有哪几个步驟?在操作过程中应注意些什么问题?为什么?2.培养基配制完成后为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行無菌检查? 3.试设计实验对饮料进行无菌检查。