显微镜直接计数法和稀释平板计數法是测定微生物数量的常用方 法. 直接计数法中常用的是显微镜直接计数法,这种方法是先将待 测样品制成悬液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1- 3-1).根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微 生物总数.直接计数法所需设备简单,可迅速得到结果,而且在計数 的同时能观察到所研究微生物的形态特征,其缺点是难以计数微小的 细菌.这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数. 间接计数法最常用的是稀释平板计 数法,它是根据微生物的培养特征而设计 的计数方法.这种方法在样品中含菌数较 少的情形下,也可以完成计数. 應用稀释平板计数法计数时,需要 将待测样品配制成均匀的系列稀释液,尽 量使样品中的微生物细胞分散开.再取一 定稀释度、一定量的稀释液接种到平板 中,使其均匀分布于平板中的培养基内； 或是将一定量的稀释液,与溶化后冷却至 45℃左右的琼脂培养基混合,倾入无菌培 养皿中,摇匀、静置待凝.经过培养后, 就由单个微生物生长繁殖形成菌落,这样 的一个菌落就代表着一个微生物个体.统 计培养基中出现的菌落数,即可推算出檢 测样品中的活菌数. FOR EXAMPLE:] 土壤中好气性细菌的计数 土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的,这些数量众多的 微生物对提高土壤肥力有重要莋用.因此,测定土壤中的抗生素含菌量可以 作为判定土壤肥力的一个重要指标. 材料器具 土壤样品；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录二)、无菌水；培养皿、 移液管、天平、锥形瓶、试管、酒精灯、恒温培养箱、摇床等. 活动程序 1.制备土壤稀释液 取土壤表层5～10 cm 处的土样.准确称取1 g 土样,放叺盛有 99 mL 无菌水的锥形瓶(250 mL,放有小玻璃珠)中,用手或摇床振荡 20 min,即制成102 倍的稀释液. 用1 mL无菌移液管,吸取10 2倍稀释液0.5 mL,移入装有4.5 mL 无菌水的试管中,配制成103 倍稀釋液. 用同样的方法可制成稀释倍数为104、105、106 的系列稀释菌液 (图1-3-2). 图 移液时,要将移液管插入液面,吹吸3 次,每次吸上的液面要高 于前一次,让菌液混合均匀并减少稀释中的误差.每配一个稀释度要 换用一支移液管. 2.取样及倒平板 将无菌培养皿编号,依次为104、105、106,每一号码设置三个 重复. 用无菌移液管三支,分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释 液各0.2 mL,注入到相应编号的培养皿中(每个稀释倍数各三个培养皿). 将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化,待冷却至45～50 ℃左 右,倾入到无菌培养皿中,每皿约15 mL,轻轻转动培养皿,使土壤 稀释液与培养基混合均匀. 3.培养 将上述接种好的平板培养基冷却后,倒置放入28～30 ℃的恒温 培养箱中培养24～36 h,直至长出菌落为止. 4.观察记录 将实验中得到的菌落数填入表1-3-1. 结果分析 1.选取具有合适菌落数的稀释倍数并計数. 在计算结果时,从接种的3 个稀释度中选择一个合适稀释倍数, 统计出菌落数(图1-3-3).选择的原则是： 过 (1) 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～300 个菌落为 宜.霉菌以每个培养皿内有10～100 个菌落为宜. (2) 同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不太悬殊. 2.将统计出的菌落数按下列公式计算,得出每克样品菌数. 每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数