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奶山羊乳腺发育的形态学研究--《东北农业大学》2008年博士论文
奶山羊乳腺发育的形态学研究
【摘要】:
乳腺是一个具有重要经济价值的器官,其生长发育和泌乳生理功能密切相关。目前,世界上仅有少数实验室致力于乳腺基础研究。尽管有关哺乳动物乳腺发育和泌乳机制的研究开展地很早,但对于乳腺基础研究,尤其是奶山羊乳腺不同发育时期的相关形态学研究甚少。本研究应用激光扫描共聚焦显微技术、透射电镜技术、组织化学相关方法和Real-time PCR系统研究关中奶山羊乳腺组织发育不同时期的显微和超微结构改变,以及乳腺主要组织成分的变化情况,为进一步研究奶山羊乳腺的发育及功能提供翔实的形态学资料。
本研究采用HE染色和透射电镜超薄切片法系统研究奶山羊乳腺组织胚后发育过程的显微和超微结构。结果表明:奶山羊乳腺发育是一个连续的过程,分为青春期、妊娠期、泌乳期和退化期四个阶段,其发育过程中的形态学、组织学和细胞生物学上的变化与其他反刍动物基本类似,与啮齿类动物存在一定差异。
为了在表达和转录两个水平上系统阐述奶山羊乳腺中糖类、脂类和蛋白质的变化规律,分别应用过碘酸-Schiff、油红O、茚三酮-Schiff染色法检测奶山羊乳腺、并用直接免疫荧光法显示乳腺中β-酪蛋白的变化,同时对奶山羊乳腺发育中相关基因的表达变化做了相对定量分析。结果表明:(1)青春期、妊娠初中期和退化期乳腺中的糖类以糖蛋白和蛋白聚糖为主,妊娠晚期和泌乳期以乳糖为主。此外,乳糖合成关键酶-β-1,4-半乳糖基转移酶的表达与乳糖表达变化趋势基本一致,即在青春期和妊娠初期低水平表达,妊娠中期后逐渐增加,到泌乳期达到最高,退化期迅速下降,逐渐恢复到青春期的水平;(2)青春期乳腺主要为寓含三酰甘油的脂肪组织,脂代谢关键酶—乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)和激素敏感脂肪酶(HSL)表达水平很高,表明此时脂代谢非常旺盛。妊娠期和泌乳期,乳腺上皮细胞逐渐早现分泌特性,乳汁的生成需要乳脂大量合成,导致ACACA在妊娠期后持续升高,至泌乳中晚期达到顶峰,此外大脂肪细胞逐渐消失,腺泡上皮细胞内出现大量脂滴。HSL进入妊娠期后表达水平迅速下降,并在整个泌乳期持续低水平表达,既在一定程度上启动脂肪动员,又保证乳腺的结构脂不被降解,维持乳腺结构的完整性;退化期,腺体内脂滴开始相互融合成大的空泡状脂肪细胞,重新呈现性成熟未妊娠状态,此时ACACA和HSL表达水平均较低;(3)青春期、妊娠初期和退化期乳腺中的蛋白质以糖蛋白和蛋白聚糖等结合蛋向为主;妊娠中晚期和泌乳期以乳蛋白为主。(4)奶山羊乳腺发育过程中,β-酪蛋白出现在妊娠中期,表达水平逐渐升高,至泌乳期达到最高,退化期逐渐下降,妊娠晚期β-酪蛋白大量蓄积在腺泡上皮细胞内而不分泌到腺泡腔中,可能与其微团分泌方式有关;β-酪蛋白基因表达水平在青春期很低,到妊娠期迅速升高,整个泌乳期β-酪蛋白表达水平比较平稳,各时点无著异,而其基因表达水平却有显著差异,可见乳腺中β-酪蛋白的表达调控可能涉及多种调节因素的参与:退化早期β-酪蛋白及其基因表达水平开始逐渐下降,但仍显著高于青春期,可能是为下一次妊娠做准备,更快进入分泌表达状态。
此外,本研究采用活细胞荧光标记法结合激光共聚焦显微技术,在亚细胞水平观察奶山羊乳腺发育中的结构变化。结果显示:奶山羊乳腺发育中,腺上皮细胞中内质网和线粒体的变化规律与乳腺组织超微结构利乳成分组化检测结果基本相符。退化期乳腺上皮细胞内仍维持一定数量的细胞器,可能是维持细胞正常机能和活动所必需的。
【关键词】:
【学位授予单位】:东北农业大学【学位级别】:博士【学位授予年份】:2008【分类号】:Q954【目录】:
中文摘要8-10
英文摘要10-12
1 前言12-28
1.1 乳腺胚后发育的解剖学与组织学12-21
1.1.1 乳房的大体解剖学12-15
1.1.2 乳腺的组织学发育15-18
1.1.3 乳腺的细胞学发育18-21
1.2 乳腺的泌乳生物学21-26
1.2.1 乳腺的泌乳过程21-23
1.2.2 乳的生物化学23-26
1.3 研究的目的和意义26-28
2 材料与方法28-39
2.1 奶山羊乳腺组织发育不同时期的显微和超微结构28-29
2.1.1 奶山羊乳腺组织发育不同时期的显微结构28-29
2.1.2 奶山羊乳腺组织发育不同时期的超微结构29
2.2 奶山羊乳腺组织发育不同时期糖类、脂类和蛋白质的变化29-32
2.2.1 实验动物与样品采集29
2.2.2 主要仪器设备及试剂29
2.2.3 实验方法29-32
2.3 奶山羊不同发育时期乳腺上皮细胞亚细胞结构的变化32-35
2.3.1 实验动物与样品采集32
2.3.2 主要仪器设备32-33
2.3.3 奶山羊乳腺上皮细胞的分离培养33-34
2.3.4 奶山羊乳腺上皮细胞主要细胞器的检测34-35
2.4 奶山羊乳腺组织发育不同时期相关基因的变化35-39
2.4.1 实验动物与样品采集35
2.4.2 主要仪器设备及试剂35-36
2.4.3 实验方法36-39
3 结果39-73
3.1 奶山羊乳腺组织发育不同时期的显微和超微结构39-47
3.1.1 奶山羊乳腺组织发育不同时期的显微结构39-42
3.1.2 奶山羊乳腺组织发育不同时期的超微结构42-47
3.2 奶山羊乳腺组织发育不同时期糖类、脂类和蛋白质的变化47-63
3.2.1 过碘酸-Schiff反应(PAS)显示乳腺中糖类的变化47-51
3.2.2 油红O染色法显示乳腺中脂类的变化51-54
3.2.3 茚三酮-Schiff反应显示乳腺中蛋白质的变化54-57
3.2.4 直接免疫荧光法显示β-酪蛋白的变化57-63
3.3 奶山羊不同发育时期乳腺上皮细胞亚细胞结构的变化63-68
3.3.1 奶山羊乳腺上皮细胞主要细胞器的检测63-66
3.3.2 奶山羊乳腺上皮细胞主要细胞器的变化66-68
3.4 奶山羊乳腺织织发育不同时期相关基因的变化68-73
3.4.1 乳腺组织总 RNA提取68-69
3.4.2 Real-time PCR69-73
4 讨论73-86
4.1 奶山羊乳腺组织发育不同时期的显微和超微结构73-76
4.1.1 青春期乳腺组织结构73-74
4.1.2 妊娠期乳腺织织结构74-75
4.1.3 泌乳期乳腺织织结构75-76
4.1.4 退化期乳腺组织结构76
4.2 奶山羊乳腺组织发育不同时期糖类、脂类和蛋白质的变化76-81
4.2.1 奶山羊乳腺中糖类的变化77-78
4.2.2 奶山羊乳腺中脂类的变化78-79
4.2.3 奶山羊乳腺中蛋白质的变化79-80
4.2.4 β-酪蛋白的变化80-81
4.3 奶山羊不同发育时期乳腺上皮细胞亚细胞结构的变化81-83
4.3.1 乳腺上皮细胞主要细胞器与乳合成81-82
4.3.2 乳腺上皮细胞主要细胞器的变化82-83
4.4 奶山羊乳腺组织发育不同时期相关基因的变化83-85
4.4.1 乳腺中脂代谢关键酶基因表达83-84
4.4.2 乳腺中乳糖合成关键酶基因表达84
4.4.3 乳腺中β-酪蛋白基因表达84-85
4.5 本论文创新点85-86
5 结论86-87
参考文献88-98
攻读学位期间发表的学术论文98
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京公网安备75号在奶山羊人工授精中利用鲜羊奶稀释精液--《四川畜牧兽医》1984年03期
在奶山羊人工授精中利用鲜羊奶稀释精液
【摘要】:正 一、鲜羊奶稀释液的制备:在采精前,用干净的小烧杯挤健康羊奶10—20毫升,用4—6层纱布滤过,然后在酒精灯上煮沸2—4分钟,再用纱布过滤,冷却至室温(秋配时室温18—25℃),除去奶汁上层奶皮,按每毫升奶汁加青霉素1000单位,链霉素单位,搅匀后马上用。
【作者单位】:
【关键词】:
【正文快照】:
一、鲜羊奶稀释液的制备:在采精前,用干净的小烧杯挤健康羊奶10一20毫升,用4一6层纱布滤过,然后在酒精灯上煮沸2一4分钟,再用纱布过滤,冷却至室温(秋配时室温18 ee25℃),除去奶汁上层奶皮,按每毫升奶汁加青霉素1000单位,链霉素1000一5。。。单位,搅匀后马上用。 二、稀释方法
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京公网安备75号关中奶山羊隐性乳房炎病原菌的分离鉴定--《动物医学进展》2013年04期
关中奶山羊隐性乳房炎病原菌的分离鉴定
【摘要】:为摸清近年来陕西关中奶山羊隐性乳房炎病原菌种类,利用奶山羊隐性乳房炎诊断试剂盒对陕西富平关中奶山羊进行随机抽样检测,采集乳房炎阳性乳样进行细菌的分离与鉴定。结果显示,从364份阳性样品中共分离出337株细菌,其中凝固酶阴性葡萄球菌186株,占所分菌的55.2%;金黄色葡萄球菌50株,占所分菌的14.8%;乳房链球菌24株,占所分细菌的7.1%;猪链球菌9株,占所分细菌的2.7%;大肠埃希菌61株,占所分细菌的18.1%;其他细菌7株,占所分细菌的2.1%。表明凝固酶阴性葡萄球菌是引起奶山羊隐性乳房炎的主要病原菌,其次是大肠埃希菌,金黄色葡萄球菌,链球菌。本研究结果为奶山羊乳房炎防治和鲜乳质量控制提供了重要的依据。
【作者单位】:
【关键词】:
【基金】:
【分类号】:S858.27【正文快照】:
陕西省关中地区是我国奶山羊的重点养殖地区[1]。奶山羊养殖过程中,乳房炎是影响奶山羊养殖效益的疾病之一,给奶山羊养殖造成较为严重的经济损失,也给羊奶产品带来了潜在的食品质量安全风险[2]。奶山羊乳房炎可分为临床乳房炎和隐性乳房炎,临床乳房炎易于诊断,一旦发现可以采
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京公网安备75号奶山羊亚急性瘤胃酸中毒营养生理机制的研究--《内蒙古农业大学》2008年博士论文
奶山羊亚急性瘤胃酸中毒营养生理机制的研究
【摘要】:
本论文采用动态pH监测记录系统和探针杂交法等先进技术手段,系统地研究了SARA发生、发展过程中瘤胃发酵模式、血液缓冲体系、代谢产物、有机酸的产生、吸收和流通规律以及微生物区系的变化,以更为全面的角度来深入探究SARA的营养生理发病机制。本研究分为三部分。
第一部分为SARA模型的建立
本试验选用6只体重30~35kg、安装有永久性瘤胃瘘管的泌乳初期关中奶山羊,采用自身对照试验法,共分为4期,每期10d,依次饲喂NFC/NDF分别为1.02(Ⅰ期)、1.24(Ⅱ期)、1.63(Ⅲ期)、2.58(Ⅳ期)的4种日粮进行诱导。结果表明:①随着日粮NFC/NDF比例提高,瘤胃pH值显著降低,瘤胃5.2pH5.5的平均持续时间随之延长,由0h延长至7.17h;pH5.5曲线面积(pH·h)也由0增加至1.09。②随着日粮NFC/NDF比例提高,前三期DMI没有显著差异,进入Ⅳ期DMI显著降低,且每日波动较大。由上述结果结合临床症状可推断:当日粮NFC/NDF=2.58,试验动物NFC日摄入量达610.5g,NDF日摄入量达236.6g时SARA建模成功,发病率为66%。
第二部分为诱导奶山羊发生SARA过程中,对瘤胃和血液代谢产物、血液缓冲体系及微生物区系影响的研究
本试验选用3只体重30~35kg、安装有永久性瘤胃瘘管的泌乳初期关中奶山羊,采用自身对照试验法,共分为4期,诱导方法同第一部分。结果表明:①随着日粮NFC/NDF比例提高,瘤胃液和血液TVFA浓度提高;SARA期,瘤胃液乙酸浓度降低,丙酸浓度增加、丁酸浓度极显著增加。瘤胃液和血液TVFA浓度显著提高,并于采食后3h和6h达到峰值,乳酸浓度较低(1mM)。②随着日粮NFC/NDF比例提高,对血气指标和血清离子浓度影响不大;SARA期,血液pH值、HCO3-含量、碱剩余(BE)、标准碳酸氢盐(SBC)均降低,并于采食后6h达最低值(p0.05);血清Na+和阴离子间隙(AG)显著增加、血清K+降低。③随着日粮NFC/NDF比例提高,瘤胃液和血液中组胺含量、内毒素含量呈增加趋势;SARA期,随着时间推移,瘤胃液和血液中组胺、内毒素显著增加。④随着日粮NFC/NDF比例提高,细菌总数、淀粉分解菌、乳酸产生菌及乳酸利用菌呈增加趋势,但乳酸利用菌增殖领先于乳酸产生菌,而原虫数量呈先升高后降低趋势,纤维降解菌呈降低趋势;SARA期,微生物区系发生了显著的变化,其中淀粉分解菌、乳酸杆菌和反刍兽新月单胞菌极显著增加,而原虫和白色瘤胃球菌显著降低。
第三部分为SARA对瘤胃乙酸、丙酸、丁酸产生、吸收规律影响的研究
本试验选用9只安装有永久性瘤胃瘘管的泌乳期关中奶山羊,按体重配对原则分为三组,采用自身对照试验法,分为对照期和SARA期。通过连续饲喂和启动-连续灌注的方法使瘤胃处于稳态条件,研究瘤胃乙酸、丙酸、丁酸的产生、吸收和流通规律。结果表明:对照期,乙酸、丙酸、丁酸的基本产生量分别为1363.80mmol/d、222.46mmol/d、120.76mmol/吸收量分别为1265.91mmol/d、172.15mmol/d、89.56mmol/d;流通量分别为97.87mmol/d、50.31mmol/d、31.20mmol/d;吸收率分别为92.70%、76.51%、73.90%。SARA期,瘤胃乙酸、丙酸、丁酸的基本产生量分别为543.11mmol/d、84.36mmol/d、43.74mmol/d;吸收量分别为474.21mmol/d、52.61mmol/d、18.84mmol/d;流通量分别为68.90mmol/d、31.75mmol/d、24.90mmol/d;吸收率分别为87.29%、62.12%、47.67%。SARA期较对照期相比,瘤胃乙酸、丙酸、丁酸的产生量分别下降了60.18%、62.14%、67.99%,吸收量分别下降了62.54%、69.46%、79.62%;流通量分别下降了29.60%、37.14%、34.62%。
综合上述试验结果表明,尽管SARA期内,瘤胃内VFA基本产生量降低,但与此同时,由于VFA的吸收和流通量大幅度下降,致使瘤胃TVFA累积增多是导致瘤胃液pH降低的主要原因,丁酸与SARA发展密切相关;微生物菌群比例失调及组胺、内毒素释放增多对促进SARA发生、发展起着重要的作用。
【关键词】:
【学位授予单位】:内蒙古农业大学【学位级别】:博士【学位授予年份】:2008【分类号】:S858.27【目录】:
Abstract5-11
第一章 文献综述11-34
1 反刍动物瘤胃酸中毒研究进展11-26
1.1 瘤胃酸中毒类型11-12
1.2 反刍动物瘤胃酸中毒发病机理的探讨12-16
1.3 亚急性瘤胃酸中毒的发生16-22
1.4 亚急性瘤胃酸中毒发生的界定指标22-23
1.5 亚急性瘤胃酸中毒的临床表现及相关疾病23-25
1.6 亚急性瘤胃酸中毒的诊断方法25-26
2 瘤胃pH 生理及瘤胃pH 动态监测记录系统的发展26-31
2.1 瘤胃pH 生理26-29
2.2 瘤胃pH 值动态监测记录系统的研究29-31
3 立题依据31-32
4 论文总体研究思路32-34
第二章 试验研究34-90
试验一奶山羊SARA 模型的建立34-43
1 材料与方法34-38
2 结果与讨论38-42
3 小结42-43
试验二不同日粮NFC/NDF 比对血液及瘤胃液VFA 及乳酸含量的影响43-50
1 材料与方法43-45
2 结果与讨论45-50
试验三不同日粮NFC/NDF 比对血液参数的影响50-55
1 材料与方法50-51
2 结果与讨论51-54
3 小结54-55
试验四不同日粮NFC/NDF 比对血液和瘤胃液内毒素及组织胺含量的影响55-63
1 材料与方法55-57
2 结果57-62
3 小结62-63
试验五 SARA 对瘤胃内乙酸、丙酸、丁酸产生、吸收和流通规律的影响63-81
1 材料与方法63-66
2 结果与讨论66-69
3 小结69-81
试验六 不同日粮NFC/NDF 比对瘤胃微生物区系的影响81-90
1 材料与方法81-86
2 结果与讨论86-90
第三章 总体讨论与结论90-96
1 论文总体讨论90-94
2 论文总体结论94-95
3 本研究创新之处95
4 对未来研究的展望95-96
参考文献98-111
作者简介111-112
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胡盼;[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
徐岩;[D];东北农业大学;2007年
程延彬;[D];黑龙江八一农垦大学;2010年
郭同军;[D];新疆农业大学;2009年
王宏勇;[D];新疆农业大学;2008年
丁学智;[D];甘肃农业大学;2006年
王志博;[D];东北农业大学;2007年
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